>
病毒包装

病毒包装

浏览量:
  慢病毒包装
  慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的遗传因子治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
  对在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源遗传因子或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。
 
  慢病毒包装系统组成
  慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。
  慢病毒表达载体,即通常所说的穿梭载体,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染293T细胞,在细胞中进行病毒的包装, 包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染。
  现在的慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。
  纤然生物提供慢病毒载体构建,RNAi(shRNA)、miRNA、过表达和干扰慢病毒包装,以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。
  纤然生物采用第三代 4质粒慢病毒包装系统,生物安全性更高;
  采用VSV-G包膜,宿主范围更广;
  产生的慢病毒滴度高,可达108~1010TU/mL;
  各种慢病毒穿梭载体可供选择:过表达、ShRNA、miRNA、Tet诱导表达载体等;
  可带有荧光报告遗传因子(GFP、RFP、mCherry、Luciferase等)和药筛标记遗传因子(Puro、Neo、Hygromycin等),有多种启动子(CMV、PGK、CAG、Ubc等)可供选择;
  3~6周内即可完成载体构建以及病毒包装服务。
 
 
  备注:
  ■ 慢病毒包装:病毒量≥1×108 TU;腺相关病毒包装:病毒量≥1×1012 GC。
  ■ 免费遗传因子调取,赠送等量病毒对照组
 
 
 
  腺病毒包装
  腺病毒是一种无包膜的球型结构的病毒,遗传物质为线型双股DNA形式。
 
  腺病毒的特点
  (1)感染范围广对人致病性低;
  (2)对增殖和非增殖细胞均具有感染性;
  (3)能有效进行增殖;
  (4)病毒滴度高;
  (5)不整合到染色体中,无插入致突变性;
  (6)外源遗传因子装载容量大。由于腺病毒的这些特点使其广泛地应用于体外遗传因子转导、体内接种疫苗、和遗传因子治疗等各个领域。
 
  纤然生物采用的AdMax重组腺病毒系统通过Cre/loxP 获得重组病毒,这个过程发生在HEK293细胞中,从而避免在细菌中重组。将携带外源遗传因子的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒遗传因子组的包装质粒共转染包装细胞,借助Cre/loxP系统的作用实现重组产生腺病毒。该系统有多种优势,包括克服了传统共转染系统重组效率低的缺点;也避免了细菌重组中的种种不确定性;操作简单,重组效率高,实现了快速高效的腺病毒包装。另外,研究者还可以根据不同的实验需求构建相应的腺病毒穿梭载体。
 
 
  技术特点
  1、复制缺陷型腺病毒颗粒,对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用;
  2、无需任何转染试剂,操作简单;
  3、适用于在难转染的细胞中进行RNA干扰、过表达特定遗传因子或过表达特定microRNA研究和In vivo 实验;
  4、不适用于感染腺病毒以后细胞发生死亡和分化的敏感细胞和需要长期稳定表达目的遗传因子的实验
 
 
 
 
 

分子生物学服务